反相高效液相色譜柱由于其分離效率高、選擇性好，檢測靈敏度高，操作自動化，應用范圍廣等特點成為廣大分析工作者的優選分析方法。流動相承擔液相分離作用的重要作用，是液相色譜柱系統的大腦。能否選擇合適的流動相，影響整個分析工作的質量。掌握流動相選擇的理論知識對于分析工作者特別是藥物分析工作者是非常必要的。
選擇用于分析的合適的流動相是一件難以確定和非常困難的任務。雖然沒有有關流動相選擇的簡易技巧、捷徑、竅門或秘訣，但卻有些理論來簡化此過程，反相高效液相色譜流動相一般是由水相和有機相組成。
反相高效液相色譜柱的物理性質：
硅膠純度：硅膠純度對強極性化合物的分離較為重要，殘留金屬離子濃度、硅膠的雜質會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發生拖尾。
A型硅膠是由金屬硅酸鹽制備而來，具有很高的金屬含量，硅膠純度較低，可用作中性化合物和非離子化合物的分離。
B型硅膠是以無金屬的工藝制備而來，純度高、酸性較弱、只含有微量的金屬，可用于分離離子化合物、可電離化合物，特別是堿性化合物。
現在的色譜柱填料以B型硅膠為主，但是不同品牌、不同類型的色譜柱的硅膠表面金屬含量還是略有差別的，如果色譜峰形較差，需要關注不同品牌色譜柱的硅膠純度。
色譜柱尺寸：增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導致峰展寬；寬柱徑，提高載樣量，但也會增加橫向擴散，同樣會導致峰展寬。窄柱徑可以節約溶劑，可減少橫向擴散，但壓力較大，對系統要求較高。
